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¿Cómo preparar plásmidos de alta calidad?

Tiempo de actualizacion : 2021-01-12

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¿Cómo preparar plásmidos de alta calidad?
La experiencia de la industria de GeneralBiosystems le enseña cómo preparar plásmidos de alta calidad.

La preparación de plásmidos a partir de cultivos bacterianos generalmente implica dos pasos: lisis bacteriana y purificación del ADN plasmídico. La lisis alcalina es el método más utilizado para la lisis celular de preparaciones a pequeña escala. Sin embargo, existen muchos métodos para las etapas de purificación del ADN plasmídico, y estos métodos tienen sus propias ventajas y desventajas, que pueden afectar la aplicación de la biología molecular posterior.

Después de la lisis y neutralización celular, una pequeña cantidad de ADN cromosómico superenrollado de gran volumen y proteínas celulares desnaturalizadas precipitarán de la solución juntos, mientras el plásmido todavía está en la solución, y luego el precipitado se puede separar fácilmente de la solución por centrifugación. o filtración.

Se separa la solución de ADN plasmídico. Pero en este momento, el ADN plasmídico todavía se mezcla con las proteínas celulares restantes y los desechos, sal, EDTA y RNasa.


Por lo tanto, se requieren pasos de purificación posteriores para eliminar otras impurezas del ADN plasmídico. Hay tres métodos de purificación de uso común como sigue:

Método de extracción de fenol-cloroformo

High-quality gene synthesis plasmid preparation process

La mezcla de fenol / cloroformo disolverá las proteínas y los lípidos contaminantes, mientras que los ácidos nucleicos permanecerán en la fase acuosa. Sin embargo, puede haber residuos de fenol o cloroformo en la muestra final, lo que inhibirá las reacciones enzimáticas posteriores.

Además, el cloroformo y el fenol son dañinos para los humanos. Por lo tanto, este método rara vez se utiliza en la producción industrial.



Precipitación de etanol


La precipitación con etanol es un método común para desalar y concentrar el ADN. El etanol puede cambiar la estructura del ADN, por lo que el ADN puede precipitarse fuera de la solución.

Después de eliminar las sales solubles y las moléculas orgánicas pequeñas, resuspenda el ADN plasmídico precipitado. El método de precipitación con etanol es económico y eficaz, pero también precipita fragmentos de ARN y ADNss.



Método de separación de la columna de purificación de ácidos nucleicos (columna de giro)

High-quality plasmid preparation method

El ácido nucleico se combinará con sílice en fase sólida en determinadas condiciones. Cambiar las condiciones puede eluir y purificar el ácido nucleico. Este método se usa generalmente en kits de minipreparación de plásmidos. Este método es conveniente y rápido, pero el costo es mayor.

Las columnas de precipitación y centrifugación de etanol son los métodos más utilizados en la industria de la síntesis y la clonación de genes. Más proveedores utilizan la precipitación de etanol debido a su menor costo.

GeneralBiosystems tiene tecnología profesional de síntesis de genes. Si encuentra problemas en el proceso de preparación de plásmidos de alta calidad, puede buscar ayuda en Generalbiosystems. Contamos con personal de investigación científica profesional para preparar y garantizar una preparación de alta calidad.