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Características de aplicación de varias etiquetas de expresión y purificación de proteínas

Tiempo de actualizacion : 2020-11-13

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Puntos de vista : 39

Características de aplicación de varias etiquetas de expresión y purificación de proteínas
La etiqueta de proteína se refiere a la proteína o polipéptido expresado por fusión con la proteína diana durante la preparación de la proteína recombinante. Las funciones de la proteína etiqueta son generalmente: promover la solubilidad y estabilidad de la proteína diana; para facilitar la detección de la proteína diana; y para facilitar la purificación y expresión de la proteína diana.

Etiqueta de proteína de pequeño peso molecular

Este tipo de etiqueta es generalmente una secuencia polipeptídica y su función principal es facilitar la purificación de proteínas y también se puede utilizar para la detección e identificación de proteínas.

Debido a su pequeño peso molecular, básicamente no afecta a la estructura de la proteína diana, y generalmente se expresa como una fusión con una proteína de mayor peso molecular.

Las etiquetas de moléculas pequeñas generalmente incluyen: etiqueta 6 * His, etiqueta Flag, etiqueta c-Myc, etiqueta HA, etiqueta Arg6, AviTag, etc. Las etiquetas más comúnmente utilizadas son la etiqueta 6 * His, etiqueta Flag y etiqueta c-Myc.


SU etiqueta
Aplicación principal: Su proteína de fusión de etiquetas también se utiliza para la investigación de la interacción proteína-proteína y proteína-ADN.
caracteristicas:
1. El peso molecular de la etiqueta es pequeño;
2. Puede purificarse en presencia / condiciones de desnaturalización de tensioactivos no iónicos. El primero se utiliza en la purificación de proteínas altamente hidrófobas y el segundo es particularmente útil en la purificación de proteínas de cuerpos de inclusión;
3. Puede aplicarse a una variedad de sistemas de expresión, con condiciones de purificación suaves;
4. Puede usarse con otras etiquetas de afinidad para construir etiquetas de afinidad parentales;
5. La inmunogenicidad es relativamente baja.

Etiqueta de bandera
Principales aplicaciones: Ampliamente utilizado en expresión, purificación, identificación, investigación funcional e interacciones de proteínas y otros campos relacionados, con mayor eficiencia de expresión en sistemas de expresión eucariotas.
caracteristicas:
1. Por lo general, no interactúa con la proteína objetivo, lo que es conveniente para que los investigadores realicen investigaciones posteriores sobre la proteína de fusión.
2. La proteína diana puede someterse directamente a cromatografía de afinidad mediante FLAG. Esta cromatografía es una purificación no desnaturalizante, que puede purificar la proteína de fusión activa con alta eficiencia de purificación.
3. Puede ser reconocido por anticuerpos anti-FLAG, por lo que la proteína de fusión que contiene FLAG puede detectarse e identificarse mediante Western Blot, ELISA y otros métodos.
4. La BANDERA fusionada al extremo N puede escindirse mediante enteroquinasa (DDDK) para obtener una proteína diana específica.

Dado que la etiqueta de peso molecular pequeño no afecta la estructura de la proteína, generalmente no es necesario eliminarla, lo que puede realizar una producción a gran escala.

Existen en el mercado los correspondientes anticuerpos etiqueta de pequeño peso molecular, que pueden facilitar la detección de la expresión de proteínas. Por lo tanto, las etiquetas de pequeño peso molecular se utilizan en experimentos y producción. Usado más.


Etiqueta de gran peso molecular

La función principal de la proteína de etiqueta de gran peso molecular es promover la solubilidad de la proteína objetivo, promover el plegamiento correcto de la proteína y mejorar la estabilidad, y la etiqueta de gran peso molecular puede aumentar la expresión de la proteína.

La proteína etiqueta macromolecular se une normalmente a la proteína diana mediante sitios de restricción, lo que es conveniente para la escisión después de la expresión y purificación.

Debido al gran peso molecular de la etiqueta, la estructura espacial puede afectar a la proteína diana y también se puede utilizar entre la proteína etiqueta y la proteína diana.

Agregue péptidos de enlace entre. Las etiquetas macromoleculares comunes son: etiqueta GST, etiqueta Sumo, etiqueta TrxA, etiqueta MBP, etc.


Etiqueta GST
Aplicación principal: el sistema de expresión de fusión GST se usa ampliamente en la expresión de diversas proteínas de fusión y puede expresarse en células huésped como E. coli y levadura.
caracteristicas:
1. Es una proteína altamente soluble;
2. Puede expresarse en grandes cantidades en E. coli, lo que puede aumentar el nivel de expresión.
3. En la mayoría de los casos, la proteína de fusión es soluble en solución acuosa y forma dímeros.

Las etiquetas GST se pueden detectar fácilmente mediante análisis enzimático o inmunoensayo. Las etiquetas ayudan a proteger las proteínas recombinantes de la degradación por proteasas extracelulares y mejoran su estabilidad.

En la mayoría de los casos, la proteína de fusión GST es total o parcialmente soluble.


Etiqueta de sumo
La proteína etiqueta SUMO es un pequeño modificador similar a la ubiquitina y uno de los miembros importantes de la superfamilia de cadenas polipeptídicas de ubiquitina. Puede usarse como una etiqueta de proteína o como un sitio para la escisión e hidrólisis de enzimas.
caracteristicas:
1. Incrementar la expresión de la proteína de fusión.
2. Resistente a la hidrólisis de proteasas, lo que promueve el correcto plegamiento de la proteína diana.
3. Mejorar la solubilidad en agua de la hoja de destino.
4. Puede eliminarse por completo mediante la enzima proteolítica SUMO para obtener la proteína objetivo sin etiqueta.

Las etiquetas proteicas juegan un papel muy importante en la producción de proteínas recombinantes, permitiendo la expresión y purificación de diversas proteínas.

En la selección de etiquetas durante el experimento, las etiquetas se pueden seleccionar de acuerdo con el propósito del experimento.

El servicio de expresión de proteínas de generalbiosystems puede basarse en experimentos de clientes. Propósito, personalice un plan de expresión de proteínas adecuado y exprese rápidamente la proteína objetivo a través de etiquetas adecuadas.