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Proceso de tecnología de subclonación —— Generalbiosystems

Tiempo de actualizacion : 2020-08-14

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Puntos de vista : 80

Proceso de tecnología de subclonación —— Generalbiosystems

Bcloning Su tecnología se refiere a la re-clonación de fragmentos de ADN de genes en el caso de la obtención de ellos, así como a una mayor analizar o recombinar el ADN del gen diana. La tecnología de subclonación también es una tecnología de clonación molecular.

La aparición de esta tecnología permite a las personas tener un estudio más profundo de las secuencias de ADN de genes, aclarar la función de los genes y analizar el fenotipo de los organismos desde la perspectiva genética.


El proceso técnico de subclonación se divide principalmente en cuatro pasos: obtener el fragmento diana, conectar el vector digerido y el fragmento diana, transferir a las células huésped e identificar y cribar.


Método de obtención del fragmento objetivo

Obtenga el fragmento del gen diana directamente de la biblioteca de genes;

Utilizando la tecnología de PCR, utilice el ARNm como plantilla para realizar la transcripción inversa de la secuencia de ADNc para obtener la biblioteca de ADNc para obtener el gen diana;

Utilice enzimas de restricción para cortar el ADN del donante en muchos fragmentos e introducirlos en las células. Después de la selección, se obtienen las células que contienen el gen diana;

Se obtiene información de la secuencia genética y se realiza una síntesis artificial in vitro.


Ligación del vector de digestión de restricción y el fragmento diana

Elija la endonucleasa de restricción adecuada para cortar la secuencia del fragmento diana del vector. En circunstancias normales, habrá tres situaciones: extremo adhesivo simétrico, extremo adhesivo asimétrico y extremo romo. En los experimentos de subclonación, se prefiere la ligadura asimétrica del extremo pegajoso, que puede dirigir ADN extraño al vector.


Transferencia a las células huésped

Por lo general, existen dos métodos para transferir el vector vinculado al gen diana a las células: transformación / transfección y transducción.

La transformación / transfección es la transferencia de plásmidos o bacteriófagos recombinantes a células huésped tratadas; el método de transducción consiste en infectar las células huésped con virus que portan ADN extraño. Generalmente, la transducción es más eficiente que los métodos de transformación.


Examen de identificación

El cribado de células clonadas suele utilizar el cribado directo. El portador tiene marcadores genéticos identificables, que pueden distinguir y separar de forma eficaz las moléculas recombinantes de las células originales.

Después de que algunas moléculas portadoras portan genes extraños, el color de las colonias o placas formadas tiene cambios obvios, como el azul a incoloro, y los cambios fenotípicos de color obvios pueden distinguir claramente las moléculas recombinantes.

Además, existen algunos otros métodos de detección de drogas que pueden detectar eficazmente células clonadas a través de fenómenos fenotípicos.



Generalbiosystems cuenta con un equipo técnico experimentado y una plataforma de síntesis de genes patentada, que puede proporcionar a los clientes servicios de subclonación integral que incluyen síntesis de genes diana, construcción y transformación de vectores, identificación y cribado.

En el servicio de subclonación, se entregarán 4μg de ADN plásmido de polvo seco, bacterias de glicerol o bacterias de punción que contienen plásmidos, resultados de secuenciación (formato ab1) y documentos de verificación de digestión enzimática que pasaron la inspección de CC. Generalbiosystems proporcionará a los clientes servicios de subclonación rápidos y precisos.