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¿Cómo abordar los problemas encontrados durante la síntesis de genes?

Tiempo de actualizacion : 2020-12-23

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¿Cómo abordar los problemas encontrados durante la síntesis de genes?
Pregunta: ¿En qué circunstancias necesito realizar una síntesis genética completa?
Respuesta: La síntesis de genes completos se puede utilizar en las siguientes situaciones
(1) Mejorar la expresión de genes extraños mediante la optimización de codones.
(2) La secuencia es conocida, pero es difícil obtener genes de muestras biológicas.
(3) Genes con duras condiciones de expresión y con una abundancia de expresión extremadamente baja.
(4) Varios genes diseñados artificialmente.
(5) Ribozimas diseñadas artificialmente.
(6) Una gran cantidad de ADNc para el chip de ADN.
(7) Varias modificaciones artificiales de genes.


Pregunta: ¿Cuánto tiempo se puede sintetizar un gen completo?

Respuesta: En teoría, no hay límite de longitud. Sin embargo, debido a factores como la tecnología de clonación, la capacidad del vector, etc., la duración de la síntesis de un gen completo generalmente no supera los 10 kb. Podemos completar toda la síntesis de genes por debajo de 10 kb.


Pregunta: ¿Qué tipo de transportistas gratuitos puede proporcionar Nupu Biotech?

Respuesta: Básicamente tenemos vectores comerciales comunes, como los vectores de la serie pET, los vectores pEGFP, los vectores de empaquetamiento de lentivirus, los vectores de ARNip, etc. También podemos aceptar vectores proporcionados por los clientes para la clonación.


Pregunta: ¿Es necesaria la optimización de codones?

Respuesta: Para los genes utilizados para la expresión de proteínas, es necesario en la mayoría de los casos. Por ejemplo, los genes de eucariotas deben expresarse en procariotas. Dado que la preferencia de codones de eucariotas es muy diferente de la de procariotas, la optimización de codones de genes mejorará significativamente la eficiencia de expresión. Algunos clientes informaron que la secuencia optimizada era 3-5 veces mayor que la secuencia original.


Pregunta: ¿Cuánto tiempo lleva la síntesis completa de genes?

Respuesta: Para fragmentos por debajo de 500 pb, el ciclo de síntesis promedio es de 10 días hábiles. Para fragmentos de 500-1000 pb, el ciclo de síntesis promedio es de 12 días hábiles. Por cada 1 kb adicional de fragmentos más largos, el tiempo promedio requerido aumenta en 7 días hábiles.


Pregunta: ¿Qué pasa si necesito subclonar en otros vectores?

Respuesta: Generalbiosystems —Gene Synthesis Service Company puede ayudarlo a conectar el gen completo sintetizado con el portador que le interesa de forma gratuita (debe proporcionar la portadora correspondiente y la información del portador al realizar un pedido). También podemos proporcionar una variedad de vectores de expresión eucariotas y procariotas de forma gratuita. Le invitamos a ponerse en contacto con nuestro personal de servicio al cliente para realizar consultas.


Pregunta: ¿Cuáles son los pasos de la síntesis total de genes?

Respuesta: La síntesis completa de genes incluye: diseñar y sintetizar cebadores; Secuencia de corte y empalme de PCR; clonación en vector; verificación de secuenciación.


Pregunta: ¿Debería elegir la síntesis de genes completos o la clonación por PCR?

Respuesta: La clonación por PCR necesita extraer ARN de tejidos o células que expresan genes, realizar la transcripción inversa en ADNc y luego amplificar el gen objetivo a partir del ADNc. El gen diana obtenido no es fácil de modificar la secuencia, y cualquier mutante debe obtenerse mediante pasos de mutación posteriores.

La optimización de codones es aún más imposible. Otra limitación importante de la clonación por PCR es que es difícil clonar con éxito genes especiales tales como genes con baja abundancia de expresión y genes con tiempo de expresión extremadamente corto. En comparación, la síntesis de genes completos es un método de clonación más flexible, más exitoso y más económico.