Hogar > Noticias > Noticias de la Industria

Varias estrategias efectivas para la expresión de proteínas

Tiempo de actualizacion : 2020-10-28

Fuente :

Puntos de vista : 45

Varias estrategias efectivas para la expresión de proteínas
El foro se empapa todos los días y el experimento se realiza todos los días, pero ¿la proteína todavía no se expresa bien?

El editor presenta por la presente varias estrategias efectivas, que son muy efectivas para obtener proteína recombinante funcional de alto rendimiento.

El sistema de expresión de mamíferos supera el problema de la modificación postraduccional de la expresión de proteínas en el sistema de expresión procariota.

La proteína expresada tiene las funciones de plegamiento y modificación, está altamente humanizada y puede usarse para análisis estructural y funcional.

Por lo general, hay dos formas de expresar proteínas en células de mamíferos: expresión transitoria y transfección estable (construcción de líneas celulares estables).


El uso de la transfección celular estable para transfectar genes extraños en cromosomas celulares puede producir la proteína diana de manera estable durante mucho tiempo. Sin embargo, el costo del experimento es alto, el ciclo es largo y la operación es difícil.

La expresión de proteína transitoria significa que el gen extraño existe en el vector libre y no ha sido transfectado en los cromosomas de la célula.

Una vez construido el plásmido, la proteína diana se puede obtener mediante los pasos de recuperación celular, transfección, cultivo celular y purificación de proteínas.

La operación es simple, el costo del experimento es bajo y el ciclo es corto. Es más adecuado para la preparación rápida y a pequeña escala de una cierta cantidad de proteína recombinante y anticuerpo recombinante.


¡Ven y descubre cómo mejorar la expresión transitoria de proteínas!

Estrategia 1: optimizar la secuencia de codificación

De acuerdo con la aplicación posterior específica, diseñe la mejor secuencia de codificación y seleccione el vector de expresión más adecuado. Antes de comenzar la expresión de proteínas, el uso de algoritmos de optimización de codones (como OptimumGene ™ o GenSmart Codon Optimization) y una guía de selección de vectores de expresión puede ahorrar tiempo, esfuerzo y gastos.
¿Tú sabes? GeneralBiosystems puede proporcionar servicios integrados desde la síntesis de genes (optimización de codones libres) hasta la expresión y purificación de proteínas .

Estrategia 2: mejorar la solubilidad de las proteínas

La baja solubilidad de las proteínas es un factor clave que provoca un bajo rendimiento de expresión de proteínas recombinantes. Sugerimos ajustar algunos parámetros de condición de expresión de uso común para mejorar la solubilidad de la proteína.

Temperatura:

Para HEK293 y otras líneas celulares de mamíferos, se recomienda cultivar las células en una incubadora de CO2 al 5% a 37 ° C. Algunos estudios han demostrado que incubar la temperatura de 37 ° C a 33 ° C 24 horas después de la transfección puede aumentar la expresión de proteínas de las células HEK293.

Aunque los medios basales proporcionados por diferentes proveedores son muy similares, diferencias menores entre ellos pueden afectar el crecimiento de líneas celulares de expresión específicas.

Asegúrese de optimizar la concentración, el pH, el tipo e incluso el lote o el número de lote de los componentes externos, como el suero agregado al medio de cultivo.


Aditivos medios:

En algunos casos, recomendamos agregar reactivos específicos al medio para aumentar la expresión de proteínas. Por ejemplo, la adición de inhibidores de histona desacetilasa puede despolimerizar la cromatina y aumentar la actividad transcripcional de genes integrados. Alternativamente, agregar factores de crecimiento específicos al medio puede ayudar a aumentar la producción de proteínas.

Estrategia 3: utilice un socio de fusión

Las etiquetas de proteínas son secuencias de péptidos cortas insertadas en proteínas recombinantes y pueden usarse para aumentar la expresión de proteínas. Por lo general, se elimina mediante digestión enzimática o reactivos químicos al final de la expresión de proteínas.

La elección de la etiqueta adecuada para un sistema de expresión en particular depende de muchos factores. Si el objetivo es obtener rendimientos extremadamente altos, debe utilizar etiquetas solubilizantes.

Por ejemplo, GST tiene una fuerte señal de inicio de la traducción y puede promover una expresión de alto nivel. Sin embargo, si se requiere un nivel de expresión más bajo, se recomienda utilizar etiquetas de epítopo más estrictas, como etiquetas His.


Estrategia 4: optimizar el método de purificación

Diseñe diferentes métodos de purificación de acuerdo con las aplicaciones posteriores y los requisitos de pureza.

Si el nivel de expresión de la proteína es alto, se puede utilizar el método de purificación por afinidad en un paso para obtener la cantidad y pureza suficientes de proteína para satisfacer diversas aplicaciones posteriores.

Si se requiere una purificación adicional, normalmente se puede realizar una cromatografía de exclusión por tamaño (SEC) después de la purificación por afinidad. Para una mayor purificación, se puede utilizar la cromatografía de intercambio iónico (Ion Exchange, IEX).