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¿Cuál es el proceso de expresión de proteínas recombinantes?

Tiempo de actualizacion : 2020-10-22

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Puntos de vista : 46

¿Cuál es el proceso de expresión de proteínas recombinantes?

La tecnología de expresión de proteínas recombinantes se puede utilizar para analizar la regulación génica y estudiar la estructura y función de las proteínas. Ya se trate de investigación funcional in vivo o producción a gran escala para investigación estructural, así como desarrollo de fármacos en el campo de la bioterapia, se requiere tecnología de expresión de proteínas.


Los siguientes son algunos puntos de conocimiento de la expresión de proteínas resumidos por General Biosystems .

Vía general de síntesis de proteínas:

ADN -> ARNm—> proteína

El proceso de operación real es:

1. Clonar o sintetizar el gen objetivo

2. Construcción de vectores

3. Expresión y purificación de proteínas

4. Expresión masiva y purificación de proteínas (o ninguna)


Clonar o sintetizar el gen objetivo

Un vector de expresión de proteínas típico incluye al menos 4 elementos principales:


• Cuadro de expresión de genes diana (incluido el promotor y la terminación del gen o la señal poli (A))

• El origen de la replicación de bacterias (ori)

• Cuadro de selección de antibióticos para un huésped específico (como higromicina B, ácido micofenólico, puromicina, blasticidina S, etc.)

• Cuadro de selección de antibióticos para Escherichia coli (como ampicilina, blasticidina S, carbenicilina, resistencia a antibióticos selectivos de zeocina, etc.)


Otros componentes incluyen:

• Sitio de clonación múltiple (MCS) (es decir, enlazador de restricciones múltiples)

• Etiquetas de epítopo

• Señal de secreción

• Sitio de reconocimiento de proteasa

• Sitio de inserción de ribosoma interno (IRES)


Varios casos comunes de expresión de proteínas

La expresión de proteínas es el contenido principal de muchos sujetos experimentales. Debido a los diferentes campos de investigación y a los diversos vectores de expresión, las características de la proteína que cada persona quiere expresar son sumamente diferentes.

Especialmente algunos socios pequeños están trabajando en el tema por primera vez. Cómo expresar la proteína y cómo organizar los procedimientos experimentales es aún más confuso.

Estos son los esquemas de expresión de proteínas recombinantes más comúnmente usados según diferentes vectores de expresión.

Compare cada caso de expresión de proteínas de los pasos experimentales, el tiempo requerido y los objetivos que deben completarse en cada paso. Puedes comparar tu propio contenido experimental y esperar que te ayude.

 

Expresión de proteínas de uso común (incluida la preparación de líneas celulares):

• Desarrollo de línea celular estable CHO

• Desarrollo de línea celular estable HEK293

• Expresión de proteínas procariotas

• Expresión transitoria en células de mamíferos

• Expresión de proteína de levadura

• Expresión de proteínas de células de insectos y baculovirus

Comparación de diferentes expresiones de proteínas

El tiempo de finalización del plan de experimento anterior es el tiempo de proceso de trabajo de un laboratorio más maduro, y puede comprenderlo de manera flexible de acuerdo con su propia disposición de experimento.

Para lograr el objetivo, también debe hacer las adiciones y reducciones apropiadas según los requisitos de su propia materia.

Si tiene un tema de investigación relativamente a gran escala y la expresión de proteínas es solo una parte de todo el tema, General Biosystems puede proporcionar los diversos servicios de expresión de proteínas anteriores.  

Ventajas técnicas de General Biosystems:

Vector de expresión altamente eficiente

cultivo celular de alta densidad

Fórmula de medio de cultivo con derechos de propiedad independientes

> 6.000 experiencia en expresión, purificación y producción de proteínas

Tecnología de renaturalización de proteínas de cuerpos de inclusión y expresión soluble