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Servicio de expresión personalizada de proteínas procariotas

Tiempo de actualizacion : 2021-02-24

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Puntos de vista : 11

Servicio de expresión personalizada de proteínas procariotas
El sistema de expresión de proteínas procariotas generalmente usa E. coli como célula huésped. Debido a las ventajas de la proliferación celular rápida, alta expresión, purificación conveniente, buena estabilidad, fuerte capacidad anticontaminación y bajo costo, el sistema de expresión de proteínas procariotas es el más maduro y confiable, y también es el más comúnmente utilizado y más económico. sistema de expresión en experimentos de expresión de proteínas.
prokaryotic protein expression system
Sin embargo, el sistema de expresión de proteínas procariotas también tiene algunas dificultades. Por ejemplo, la preferencia de uso del codón de la región codificante del gen que se va a expresar o la incompatibilidad de los elementos reguladores en el vector con las bacterias hospedadoras dan como resultado la incapacidad o baja expresión de la proteína diana, e incluso la proteína diana es insoluble. aunque la expresión tenga éxito.

Con la ayuda del software de optimización de codones líder en la industria y nuestros más de diez años de experiencia en optimización de proteínas y purificación de expresión, Generalbiosystems le brinda soporte técnico profesional en todos los aspectos de la expresión procariota, no solo asegurando la expresión de su proteína objetivo, sino que También puede garantizar productos de entrega de alta pureza de acuerdo con sus necesidades, ¡lo que le permite concentrarse en experimentos posteriores!

Contenido personalizado del servicio de expresión de proteínas procariotas


Construcción de vectores de expresión (opcional)

Incluyendo optimización de codones, síntesis de genes y subclonación.

Una vez que el software líder en la industria de Generalbiosystems optimiza la secuencia de genes, la expresión de la proteína se puede aumentar de varias a decenas de veces.

Generalbiosystems puede proporcionar a los clientes una variedad de vectores comerciales comunes, como pET, pCOLD, etc. Además, Generalbiosystems también utiliza potentes funciones de construcción de componentes de biología sintética para optimizar y transformar la serie pSYNO de vectores de expresión procarióticos, incluidos sumo, MBP, GST, Trx y otras etiquetas de expresión procariotas para su elección. Póngase en contacto con sales@biolytic.cn para obtener más detalles.


Optimización de las condiciones de expresión

Partiendo de la premisa de que la secuencia es correcta, la cepa huésped tiene una influencia muy obvia en el efecto de expresión.

Generalbiosystems transforma plásmidos recombinantes en una variedad de bacterias hospedadoras de expresión, incluidas BL21 (DE3), ArcticExpress (DE3), Rosetta (DE3) pLySs, Rosetta-gami B (DE3) y otras cepas distintivas.

Después de la transformación, seleccionamos al menos 6 plásmidos de clones positivos para la prueba de expresión y la optimización.

Durante la prueba pequeña, optimizaremos y probaremos las condiciones de cultivo adecuadas para varias cepas, incluidos factores como la temperatura, el medio, el tipo de inductor, el tiempo de inducción y la cantidad de inducción. Detecte el nivel de expresión y la solubilidad mediante SDS-PAGE y proporcione sugerencias de viabilidad sobre la posibilidad de escalar o escalar.


Amplificación, expresión y purificación de proteínas

Optimizado para el gen de condición de expresión apropiado, use 1L o una escala de cultivo mayor para inducir la expresión de bacterias recombinantes. Después del cultivo y la inducción, realice una purificación por afinidad en un paso o intercambio iónico, una purificación hidrófoba y en gel en varias etapas (opciones opcionales o múltiples). De forma predeterminada, SDS-PAGE detecta la pureza y Western blot detecta la corrección (opcional, los clientes proporcionan anticuerpos primarios verificados).

Postprocesamiento de proteínas (opcional)

Para proteínas con requisitos especiales adicionales, Generalbiosystems le ofrece una variedad de opciones de posprocesamiento, que incluyen eliminación de etiquetas, esterilización por filtración, eliminación de endotoxinas, liofilización, secuenciación N-terminal y otros servicios de proteína purificada. Para sus necesidades especiales, nuestros ingenieros experimentados pueden brindarle servicios posteriores a la medida.