Hogar > Noticias > Noticias de la Industria

Precauciones para la purificación de proteínas en células de mamíferos

Tiempo de actualizacion : 2020-12-07

Fuente :

Puntos de vista : 29

Precauciones para la purificación de proteínas en células de mamíferos
Este artículo presenta principalmente las precauciones de purificación p rotein en células de mamífero .

Las principales propiedades de la proteína recombinante producida por células animales generales se pueden resumir como sigue: secretada al medio de cultivo en forma natural y correctamente plegada; correcta modificación postraduccional; sin restricción sobre el peso molecular de la proteína recombinante; las células de mamífero no producen endotoxina; baja concentración de producto; cultivo El contenido de proteína en la base puede ser alto; el proceso de producción puede contener virus, ADN o proteínas celulares, que deben eliminarse mediante procesos posteriores.

mammalian cells


Las estrategias de purificación de proteínas derivadas de células de mamíferos no solo deben poder ser reproducibles, cumplir ciertos requisitos de pureza y formas específicas, sino también eliminar contaminantes potencialmente dañinos que pueden originarse en el proceso de preparación, incluidas proteínas animales, virus y virus en células o cultivos. . ADN o antibióticos para cultivo celular, etc. Los siguientes asuntos requieren atención:


① Requisitos de higiene, todos los pasos de separación deben poder operar en condiciones tranquilas y no deben introducirse biocargas ni endotoxinas.

Las materias primas purificadas deben ser estériles, el contenido de endotoxinas debe ser muy bajo y no se deben utilizar antibióticos.


② Los materiales de proceso que no se pueden esterilizar con vapor (como los portadores cromatográficos) deben limpiarse y despirogenarse mediante otros métodos eficaces.

Los métodos típicos incluyen el tratamiento con soluciones desinfectantes como 0,2 0.2 0,5 mol / L de NaOH o etanol ácido (60% de etanol / 0,5 mol / L de ácido acético) y una mezcla de hidróxido de sodio / etanol (como 50% de etanol / 0,2 mol / L de NaOH). ). Se puede utilizar y el tiempo de tratamiento es generalmente de 4 a 24 horas a temperatura ambiente.


③ La integridad del proceso asegura que el producto pueda pasar directamente de un paso de operación al siguiente, sin operaciones adicionales en el medio, lo cual es ideal.


④ Independientemente de la fuerza mecánica o de las condiciones de cultivo desfavorables, las células de mamíferos son mucho más débiles que las células microbianas, por lo que se debe tener cuidado para mantener las células intactas.

Es necesario controlar cuidadosamente las condiciones de cultivo y separación celular para evitar la contaminación del producto por las proteínas intracelulares liberadas debido a la lisis celular.


Los esquemas de purificación típicos para proteínas recombinantes o anticuerpos monoclonales producidos por cultivos de células de mamíferos o animales transgénicos generalmente incluyen separación preliminar (filtración o centrifugación, concentración de ultrafiltración), cromatografía de intercambio iónico (o afinidad), filtración en gel, etc. Un producto con una pureza de 99 Se obtiene% a 100%.