Precauciones para la purificación de proteínas en células de mamíferos

Las estrategias de purificación de proteínas derivadas de células de mamíferos no solo deben poder ser reproducibles, cumplir ciertos requisitos de pureza y formas específicas, sino también eliminar contaminantes potencialmente dañinos que pueden originarse en el proceso de preparación, incluidas proteínas animales, virus y virus en células o cultivos. . ADN o antibióticos para cultivo celular, etc. Los siguientes asuntos requieren atención:

① Requisitos de higiene, todos los pasos de separación deben poder operar en condiciones tranquilas y no deben introducirse biocargas ni endotoxinas.

Las materias primas purificadas deben ser estériles, el contenido de endotoxinas debe ser muy bajo y no se deben utilizar antibióticos.

② Los materiales de proceso que no se pueden esterilizar con vapor (como los portadores cromatográficos) deben limpiarse y despirogenarse mediante otros métodos eficaces.

Los métodos típicos incluyen el tratamiento con soluciones desinfectantes como 0,2 0.2 0,5 mol / L de NaOH o etanol ácido (60% de etanol / 0,5 mol / L de ácido acético) y una mezcla de hidróxido de sodio / etanol (como 50% de etanol / 0,2 mol / L de NaOH). ). Se puede utilizar y el tiempo de tratamiento es generalmente de 4 a 24 horas a temperatura ambiente.

③ La integridad del proceso asegura que el producto pueda pasar directamente de un paso de operación al siguiente, sin operaciones adicionales en el medio, lo cual es ideal.

④ Independientemente de la fuerza mecánica o de las condiciones de cultivo desfavorables, las células de mamíferos son mucho más débiles que las células microbianas, por lo que se debe tener cuidado para mantener las células intactas.

Es necesario controlar cuidadosamente las condiciones de cultivo y separación celular para evitar la contaminación del producto por las proteínas intracelulares liberadas debido a la lisis celular.