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Método de clonación por PCR | Ventaja | Desventajas

Tiempo de actualizacion : 2020-08-04

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Método de clonación por PCR | Ventaja | Desventajas

La diferencia entre la clonación por PCR y la clonación tradicional es que puede amplificar fragmentos de ADN diana, o incluso vectores, mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y unirlos sin el uso de enzimas de restricción.

La clonación por PCR es un método rápido de clonación de genes, generalmente utilizado para proyectos que requieren un mayor rendimiento, y el rendimiento de estos proyectos es mayor que el de los métodos de clonación tradicionales. Permite la clonación de fragmentos de ADN que no están disponibles en grandes cantidades.


Por lo general, se realiza una reacción de PCR para amplificar la secuencia de interés, y luego se conecta al vector mediante ligación de extremos romos o de una sola base antes de la transformación.

La clonación por PCR temprana de la ADN polimerasa Taq se usa a menudo para amplificar el gen.

Esto da como resultado un producto de PCR en el que se añade un único residuo de adenina (A) al extremo 3 'del producto de PCR, que es independiente de la plantilla, mediante la acción normal de la polimerasa.

Estos productos de "cola A" se ligan luego a un vector de cola T complementario usando ADN ligasa T4 y luego se transforman.


Ahora, las ADN polimerasas de alta fidelidad también se usan comúnmente para amplificar secuencias que no contienen productos de PCR de extensión 3 '.

El fragmento de extremos romos se liga al vector plásmido mediante una reacción de ligación típica o mediante la acción de un vector "activado" que contiene una enzima ligada covalentemente (generalmente topoisomerasa I), que facilita la ligación del vector: inserto.

Algunos sistemas de clonación por PCR contienen vectores "suicidas" diseñados que incluyen un gen tóxico al que el producto de la PCR debe ligarse con éxito para permitir la propagación de cepas que absorben la molécula recombinante durante el proceso de transformación.


Una deficiencia típica que comparten muchos métodos de clonación por PCR es que deben usarse vectores especiales.

Estos vectores suelen ser vendidos por proveedores (como NEB) en formatos linealizados listos para usar y pueden agregar costos significativos al costo total de la clonación.

Del mismo modo, el uso de vectores spe especí- limita las opciones de los investigadores para resistencia a los antibióticos, la identidad del promotor, parejas de fusión y otros elementos reguladores.

Ventaja de la clonación por PCR :


✧ Eficiente, con portadora dedicada
Adecuado para alto rendimiento

Desventajas de la clonación por PCR :

Selección limitada de vectores
mayor costo
Falta de control de secuencia en el cruce
La clonación de múltiples fragmentos no es fácil
✧ La clonación direccional es difícil