Descripción general de la tecnología de clonación por PCR
Tiempo de actualizacion : 2020-08-12
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Puntos de vista : 72
Métodos tradicionales de amplificación de ADN:
El método tradicional de amplificación de ADN es la clonación molecular, que requiere la construcción de un vector que contenga el gen diana que se introducirá en las células para su amplificación y sondas para cribado, incluidas las técnicas de digestión, ligación, transformación, cultivo e hibridación de la sonda del ADN. Aunque no hay dificultades técnicas, la operación es complicada, el ciclo es largo y no propicia la popularización.
Ventajas de la tecnología de clonación por PCR:
La tecnología de clonación por PCR fue propuesta por primera vez por Mullis en los Estados Unidos en 1983, y la reacción en cadena de la polimerasa, el método simple de amplificación del ADN, se inventó en 1985, lo que significó el verdadero nacimiento de la tecnología de clonación por PCR.
A partir de 2013, la clonación por PCR se ha desarrollado hasta la tecnología de tercera generación. La tecnología de clonación por PCR puede amplificar una pequeña cantidad de fragmentos de ADN diana millones de veces.
La tecnología de clonación por PCR se utiliza ampliamente en los campos de la microbiología, la medicina, la agricultura y la arqueología en virtud de su alta sensibilidad, fuerte especificidad, alto rendimiento, buena reproducibilidad, rapidez y simplicidad.
Se ha popularizado enormemente en varios laboratorios. La tecnología de clonación molecular tradicional se simplifica, de modo que los investigadores pueden analizar e identificar más fácilmente el gen objetivo.
Principios básicos de la tecnología de clonación por PCR:
La clonación por PCR se basa en el uso de ADN que se desnaturaliza y se vuelve monocatenario a una temperatura alta de 95 ° C in vitro.
A bajas temperaturas (generalmente alrededor de 60 ° C), los cebadores y las hebras simples se combinan de acuerdo con el principio de apareamiento complementario de bases, y luego la temperatura se ajusta a la ADN polimerasa óptima.
A la temperatura de reacción (aproximadamente 72 ° C), la ADN polimerasa sintetiza la cadena complementaria a lo largo de la dirección del ácido fosfórico hasta el azúcar de cinco carbonos (5'-3 ').
La máquina de PCR basada en polimerasa es en realidad un dispositivo de control de temperatura, que puede controlar bien la temperatura de desnaturalización, la temperatura de renaturalización y la temperatura de alargamiento.
Como método básico de biología molecular, la tecnología de clonación por PCR se utiliza ampliamente en aplicaciones de biología molecular como la clonación de genes, la recombinación de genes, el análisis de secuencias de ADN y la detección cuantitativa de genes. Al mismo tiempo, la tecnología de clonación por PCR también se utiliza en la detección de genes relacionados con tumores médicos, el diagnóstico temprano de enfermedades genéticas, etc., proporcionando medios técnicos eficaces para la identificación médica y el análisis de riesgos.
La tecnología de clonación patentada de Generalbiosystems puede ayudar a los clientes a clonar el gen objetivo en cualquier posición designada del vector deseado sin depender de los sitios de restricción de vectores, satisfaciendo las diversas ideas de clonación de los clientes y ahorrando mucho tiempo en comparación con el tiempo de clonación normal.
Para la clonación de diferentes fragmentos de genes del mismo vector, también podemos completar eficazmente servicios de subclonación de alto rendimiento.我是标题
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