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Cómo obtener el gen diana

Tiempo de actualizacion : 2020-09-02

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Cómo obtener el gen diana
Los procedimientos operativos básicos de la ingeniería genética incluyen principalmente cuatro pasos: adquisición del gen objetivo, construcción del vector de expresión génica, introducción del gen objetivo en las células receptoras, detección e identificación del gen objetivo.
A continuación se presenta primero la adquisición del gen diana.


1. Determine el objeto del experimento y el propósito del experimento.

Por ejemplo, si queremos preparar verduras modificadas genéticamente, debemos elegir una verdura. El tomate, como el vegetal más productivo del mundo, tiene mucha investigación relacionada.

El método de modificación genética también está maduro. A todo el mundo le encanta comerlo. Se puede utilizar como verdura y fruta. Es muy conveniente para cultivar en casa y es una muy buena elección.


2. Encuentra el gen objetivo


Una vez que hayamos determinado el rasgo que queremos cambiar, entonces necesitamos encontrar el gen que controla este rasgo.
Busque archivos de secuencias de genes relevantes en Internet.

3. Clonación de genes


Dado que necesitamos amplificar una secuencia de ADNc de especies de tomate, esto significa que tenemos que extraer el ARN de tomate, usar la transcripción inversa para expandir el ADNc y luego usar la ADN polimerasa para expandir el fragmento del gen bicatenario.

Los tres reactivos principales aquí son la transcriptasa inversa, la ADN polimerasa (comúnmente conocida como enzima PCR) y el reactivo Trizol para la extracción de ARN. La expansión de la enzima PCR de fragmentos de 2KB con la enzima Taq es suficiente.


¡Entonces podemos mencionar ARN! El ARN extraído se coloca en el congelador.

¿Todavía recuerdas el archivo de secuencia genética que descargamos antes? Ahora tenemos que instalar algún software para abrirlo, diseñar cebadores para amplificación de genes y construir vectores.


Luego, seleccione la primera secuencia de cadena positiva de 30 bases y la última secuencia de cadena negativa de 30 bases, y utilícelas como secuencias de cebadores, y luego busque una empresa biológica en Internet que pueda sintetizar cebadores, como Generalbiosystems .

Envíeles la secuencia y las cartillas le serán enviadas en dos días. Los dos cebadores probablemente cuestan menos de 7 $. Luego, siga las instrucciones de la transcriptasa inversa para realizar la transcripción inversa con una máquina de PCR y luego use el producto de transcripción inversa como plantilla para amplificar el gen con la máquina de PCR de acuerdo con las instrucciones de la enzima de PCR.


Luego gaste 10 $ para comprar un marcador de ADN de 5K y polvo de agar para ejecutar el gel, y luego envíe un tinte (como EB) que se agrega al gel para teñir el ADN, y ejecute un gel para confirmar que hay un 2K banda.

En este punto, se completa la clonación del gen. Si tiene dinero extra, puede enviar este producto de PCR a la empresa que solicita los cebadores para probar la secuencia y confirmarla.