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Aplicación y desarrollo de la clonación por PCR

Tiempo de actualizacion : 2020-08-11

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Puntos de vista : 80

Aplicación y desarrollo de la clonación por PCR

La tecnología de reacción en cadena de polimerasa ( PCR ) tiene muchas ventajas, como una fuerte especificidad, alta sensibilidad, rapidez y simplicidad, y puede amplificar el gen objetivo deseado a decenas de miles de veces en poco tiempo.

Hoy, con el rápido desarrollo de las ciencias de la vida, la tecnología de clonación por PCR se ha convertido en una tecnología de rutina en biología molecular. La tecnología de clonación por PCR se ha utilizado ampliamente en investigación biológica, medicina, detección de virus, industria alimentaria, etc.


Tecnología de PCR aplicada a la clonación de genes

El uso de la tecnología de PCR para la clonación y subclonación de genes ha jugado un papel muy importante en la investigación de biología celular.


La tecnología de clonación por PCR puede amplificar una sola copia de un gen varios millones de veces, y los fragmentos de ADN específicos generados pueden ser microgramos (pg), omitiendo la digestión de ADN necesaria para clonar un fragmento de gen específico del ADN genómico.

El tedioso proceso experimental de ligación al ADN del vector, transformación, establecimiento de la biblioteca de ADN, selección y determinación de genes y subclonación.


Tecnología de clonación por PCR aplicada a la recombinación de ADN

En la investigación de biología molecular, se pueden insertar genes específicos o fragmentos de ADN de diferentes fuentes en virus, plásmidos u otros vectores in vitro mediante tecnología de clonación por PCR para construir moléculas de ADN recombinante y luego introducirlas en las células receptoras para su amplificación y reproducción.


Después de la selección, las células transformantes que contienen el gen diana se amplifican y extraen para obtener una gran cantidad de ADN.

La tecnología del ADN recombinante se puede aplicar a la investigación en el proyecto del genoma humano, expresión de proteínas valiosas, diagnóstico y tratamiento de genes, plantas y animales modificados genéticamente y otros campos.


Aplicación de la tecnología de clonación por PCR en la detección cuantitativa de genes


La tecnología de clonación por PCR puede controlar cuantitativamente el número de copias del gen objetivo en la muestra y colocar el gen objetivo y una única copia del gen de referencia en el mismo tubo de ensayo para la clonación por PCR.


Observe la intensidad de la banda después de la separación por electroforesis, o marque un radionúclido en el extremo 5 'del cebador y detecte el número de copias del gen detectando la intensidad de radiactividad de las dos bandas.

El uso de la tecnología de clonación por PCR también puede completar la detección cuantitativa de ARNm.


Primero, avance el ARN total, agregue cebadores complementarios a las regiones 3 y 7 del ARNm, sintetice el ADNc bajo la acción de la transcriptasa inversa y luego consulte los pasos de detección cuantitativa de ADN.



La aplicación de la tecnología de clonación por PCR puede cuantificar con precisión el tuRNA, e incluso se puede detectar 1TIRNA que no se pudo encontrar mediante la hibridación de transferencia Northern.


El cambio de genes endógenos y la invasión de genes extraños también son una gran amenaza para las enfermedades humanas. Sin embargo, independientemente de si la causa de la enfermedad se debe a cambios genéticos, siempre que exista el patógeno, se puede encontrar el ácido nucleico.


Como resultado, la tecnología de clonación por PCR y sus tecnologías relacionadas se han desarrollado hasta ahora, y se pueden aplicar completamente a la detección y el diagnóstico de patógenos de enfermedades infecciosas, detección de genes relacionados con tumores, diagnóstico temprano de enfermedades genéticas, trasplante de médula ósea HLA- D site matching y análisis químico y medicina forense Investigación en otros campos.


Generalbiosystems '   La tecnología de clonación patentada puede ayudar a los clientes a clonar el gen objetivo en cualquier posición designada del vector deseado sin depender del sitio de restricción del vector, satisfaciendo las diversas ideas de clonación de los clientes y ahorrando mucho en comparación con el tiempo de clonación normal.

Para la clonación del mismo vector de diferentes fragmentos de genes, también podemos completar eficientemente servicios de subclonación de alto rendimiento.